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細(xì)胞培養(yǎng)四部曲

發(fā)布時(shí)間:2012-07-05瀏覽:4192次

1.細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)條件為含有 10% 胎牛血清的培養(yǎng)液(根據(jù)不同的細(xì)胞選擇合適的細(xì)胞培養(yǎng)液),37下在含有 5% CO2 的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 

2.細(xì)胞凍存細(xì)胞消化后收集, 1000rpm 離心 5min ,去上清,用 1ml 含有 10% DMSO的培養(yǎng)液重懸,逐級(jí)降溫后轉(zhuǎn)入-70℃凍存 24h,轉(zhuǎn)入液氮中長(zhǎng)期保存。 

3.細(xì)胞復(fù)蘇:將液氮中凍存的細(xì)胞取出, 37℃水浴中融化,取出后 1000rpm 離心 5min ,去上,用培養(yǎng)液重懸后接入培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

4.細(xì)胞傳代:對(duì)于貼壁細(xì)胞將培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中的培液吸干, 用滅過(guò)菌的 1×PBS 沖洗后加入一定量的 0.25% 胰酶消化,待鏡下觀察細(xì)胞變圓還未漂起時(shí),加入有血清的正常培液終止消化,吹打細(xì)胞成細(xì)胞懸液后將細(xì)胞接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。對(duì)于懸浮細(xì)胞可以直接傳代也可以離心法傳代。直接傳代是讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后,將上清吸掉1/2-2/3吹打細(xì)胞形成細(xì)胞懸液后,分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。離心法傳代將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi), 1000rpm,5分鐘,去除上清,加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi),吹打細(xì)胞形成細(xì)胞懸液后,分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

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